Le professeur Stangerson et sa fille Mathilde vivent au château du Glandier où ils poursuivent des recherches scientifiques.

Une nuit, Mathilde échappe de justesse à une tentative d'assassinat dans sa chambre jaune, pourtant fermée de l'intérieur.

Le jeune reporter Rouletabille se rend sur les lieux avec Sainclair, son ami avocat. Au terme d'une enquête périlleuse et angoissante, Rouletabille va élucider

Le mystère de la chambre jaune.